Tinción de Ziehl-Neelsen

La tinción de Ziehl-Neelsen es un tipo de tinción acidorresistente, introducida por primera vez por Paul Ehrlich. La tinción de Ziehl-Neelsen es una tinción bacteriológica utilizada para identificar organismos acidorresistentes, principalmente micobacterias. Lleva el nombre de dos médicos alemanes que modificaron la tinción: el bacteriólogo Franz Ziehl (1859–1926) y el patólogo Friedrich Neelsen (1854–1898).

Micobacterias

En muestras de anatomía patológica, la inmunohistoquímica y las modificaciones de la tinción de Ziehl-Neelsen (como el método de Fite-Faraco) tienen una utilidad diagnóstica comparable. Ambos son superiores a la tinción tradicional de Ziehl-Neelsen.

El género Mycobacterium es una bacteria de crecimiento lento, formada por pequeños bastoncillos ligeramente curvados o rectos, y se consideran grampositivas. Algunas micobacterias son saprofitas de vida libre, pero muchas son patógenos que causan enfermedades en animales y humanos. Mycobacterium bovis causa tuberculosis en el ganado. Dado que la tuberculosis se puede transmitir a los humanos, la leche se pasteuriza para matar cualquiera de las bacterias. La especie de micobacteria que causa la tuberculosis (TB) en humanos es Mycobacterium tuberculosis, que es una bacteria transportada por el aire que típicamente infecta los pulmones humanos. Las pruebas de TB incluyen análisis de sangre, pruebas cutáneas y radiografías de tórax.Cuando se miran los frotis para TB, se tiñen usando una tinción acidorresistente. Estos organismos resistentes a los ácidos como Mycobacterium contienen grandes cantidades de sustancias lipídicas dentro de sus paredes celulares llamadas ácidos micólicos. Estos ácidos resisten la tinción por métodos ordinarios como la tinción de Gram. También se puede usar para teñir algunas otras bacterias, como Nocardia. Los reactivos utilizados para la tinción de Ziehl-Neelsen son carbolfucsina, alcohol ácido y azul de metileno. Los bacilos acidorresistentes son de color rojo brillante después de la tinción.

Hongos

La tinción de Ziehl-Neelsen es un tipo de tinción fúngica de espectro estrecho. Las tinciones fúngicas de espectro estrecho son selectivas y pueden ayudar a diferenciar e identificar hongos. Los resultados de la tinción de Ziehl-Neelsen son variables porque muchas paredes celulares fúngicas no son resistentes a los ácidos. Un ejemplo de un tipo común de hongo resistente al ácido que generalmente se tiñe con la tinción de Ziehl-Neelsen se llama Histoplasma (HP). El histoplasma se encuentra en el suelo y en las heces de pájaros y murciélagos. Los seres humanos pueden contraer histoplasmosis por inhalación de las esporas fúngicas. Histoplasma ingresa al cuerpo y va a los pulmones donde las esporas se convierten en levadura. La levadura ingresa al torrente sanguíneo y afecta los ganglios linfáticos y otras partes del cuerpo. Por lo general, las personas no se enferman por inhalar las esporas, pero si lo hacen, generalmente tienen síntomas similares a los de la gripe. Otra variación de este método de tinción se utiliza en micología para teñir diferencialmente incrustaciones acidorresistentes en las hifas cuticulares de ciertas especies de hongos del género Russula. Algunas endosporas libres pueden confundirse con pequeñas levaduras, por lo que se utiliza la tinción para identificar los hongos desconocidos. También es útil en la identificación de algunos protozoos, a saber, Cryptosporidium e Isospora.. La tinción de Ziehl-Neelsen también puede dificultar el diagnóstico en el caso de la paragonimiasis porque los óvulos en la muestra de esputo para detectar óvulos y parásitos (O&P) pueden disolverse con la tinción y se usa a menudo en este entorno clínico porque los signos y síntomas de la paragonimiasis se asemejan mucho a los de tuberculosis.

Historia

En 1882 Robert Koch descubrió la etiología de la tuberculosis. Poco después del descubrimiento de Koch, Paul Ehrlich desarrolló una tinción para Mycobacterium tuberculosis, llamada tinción de hematoxilina de alumbre. Franz Ziehl luego alteró la técnica de tinción de Ehrlich usando ácido fénico como mordiente. Friedrich Neelsen mantuvo la elección de mordiente de Ziehl pero cambió la tinción primaria a carbol fucsina. Las modificaciones de Ziehl y Neelsen juntas han desarrollado la tinción de Ziehl-Neelsen. Joseph Kinyoun desarrolló otra tinción acidorresistente utilizando la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen pero eliminando el paso de calentamiento del procedimiento. Esta nueva mancha de Kinyoun se denominó mancha de Kinyoun.

Procedimiento

Un procedimiento típico de tinción AFB consiste en dejar caer las células en suspensión en un portaobjetos, luego secar el líquido al aire y fijar las células con calor.

Resumen de la tinción acidorresistente (tinción de Ziehl-Neelsen)
Aplicación de	Reactivo	color de celda
Ácido rápido	ayuno no ácido
tinte primario	fucsina carbol	Rojo	Rojo
decolorante	alcohol ácido	Rojo	Incoloro
contramancha	Azul de metileno/verde malaquita	Rojo	Azul

Los estudios han demostrado que una tinción AFB sin cultivo tiene un valor predictivo negativo bajo. Se debe realizar un cultivo de AFB junto con una tinción de AFB; esto tiene un valor predictivo negativo mucho más alto.

Explicación del mecanismo

Inicialmente, la carbol fucsina tiñe cada célula. Cuando se destiñen con alcohol ácido, solo las bacterias no ácidorresistentes se destiñen, ya que no tienen una capa lipídica espesa y cerosa como las bacterias ácidorresistentes. Cuando se aplica la contratinción, las bacterias que no son resistentes a los ácidos las recogen y se vuelven azules (azul de metileno) o verdes (verde de malaquita) cuando se observan bajo el microscopio. Las bacterias acidorresistentes retienen carbol fucsina, por lo que se ven rojas.

Modificaciones

• Alcohol de ácido sulfúrico al 1% para actinomicetos, nocardia.
• Alcohol de ácido sulfúrico al 0,5–1% para ooquistes de isospora, cyclospora.
• Alcohol de ácido sulfúrico al 0,25–0,5 % para endosporas bacterianas.
• Tinción diferencial: se usa ácido acético glacial, no se aplica calor, la tinción secundaria es azul de metileno de Loeffler.
• También está disponible la modificación de Kinyoun (o técnica fría de Ziehl-Neelsen).
• Un protocolo en el que se sustituye un detergente por el fenol altamente tóxico en la solución de tinción de fucsina.