Frotis de sangre
Un frotis de sangre, frotis de sangre periférica o frotis de sangre es una fina capa de sangre que se extiende sobre un portaobjetos de vidrio para microscopio y luego se tiñe con de tal manera que permita examinar microscópicamente las distintas células sanguíneas. Los frotis de sangre se examinan en la investigación de trastornos hematológicos (de la sangre) y se emplean habitualmente para buscar parásitos sanguíneos, como los de la malaria y la filariasis.
Preparación
Un frotis de sangre se realiza colocando una gota de sangre en un extremo de un portaobjetos y utilizando un esparcidor para dispersar la sangre a lo largo del portaobjetos. El objetivo es obtener una región, llamada monocapa, donde las células estén lo suficientemente espaciadas como para poder contarlas y diferenciarlas. La monocapa se encuentra en el "borde emplumado" creado por el deslizador del esparcidor a medida que atrae la sangre hacia adelante.
El portaobjetos se deja secar al aire, después de lo cual la sangre se fija al portaobjetos sumergiéndolo brevemente en metanol. El fijador es esencial para una buena tinción y presentación de los detalles celulares. Después de la fijación, el portaobjetos se tiñe para distinguir las células entre sí.
El análisis de sangre de rutina en los laboratorios médicos generalmente se realiza en extensiones de sangre teñidas con tinciones de Romanowsky, como la tinción de Wright, la tinción de Giemsa o la tinción de Diff-Quik. El tinte combinado Wright-Giemsa también es una opción popular. Estas tinciones permiten la detección de anomalías en los glóbulos blancos, los glóbulos rojos y las plaquetas. Los hematopatólogos suelen utilizar otras tinciones especializadas para ayudar en el diagnóstico diferencial de los trastornos sanguíneos.
Después de la tinción, la monocapa se observa bajo un microscopio con un aumento de hasta 1000x. Se examinan las células individuales y se caracteriza y registra su morfología.
Importancia clínica
El examen de frotis de sangre generalmente se realiza junto con un hemograma completo para investigar resultados anormales o confirmar resultados que el analizador automatizado ha marcado como no confiables.
El examen microscópico de la forma, el tamaño y la coloración de los glóbulos rojos es útil para determinar la causa de la anemia. Trastornos como la anemia por deficiencia de hierro, la anemia de células falciformes, la anemia megaloblástica y la anemia hemolítica microangiopática provocan anomalías características en el frotis sanguíneo.
Las proporciones de los diferentes tipos de glóbulos blancos se pueden determinar a partir del frotis de sangre. Esto se conoce como diferencial manual de glóbulos blancos. El diferencial de glóbulos blancos puede revelar anomalías en las proporciones de los tipos de glóbulos blancos, como neutrofilia y eosinofilia, así como la presencia de células anormales como las células blásticas circulantes que se observan en la leucemia aguda. Las anomalías cualitativas de los glóbulos blancos, como la granulación tóxica, también son visibles en el frotis de sangre. Los analizadores de hemograma completo modernos pueden proporcionar un diferencial automatizado de glóbulos blancos, pero tienen una capacidad limitada para diferenciar células inmaduras y anormales, por lo que con frecuencia está indicado el examen manual del frotis de sangre.
El examen de frotis de sangre es el método de diagnóstico preferido para ciertas infecciones parasitarias, como la malaria y la babesiosis. En raras ocasiones, las bacterias pueden ser visibles en el frotis de sangre en pacientes con sepsis grave.
Malaria
El diagnóstico preferido y más confiable de la malaria es el examen microscópico de frotis de sangre, porque cada una de las cuatro especies principales de parásitos tiene características distintivas. Tradicionalmente se utilizan dos tipos de frotis de sangre.
- Tin smears son similares a las películas de sangre habituales y permiten la identificación de especies, ya que la apariencia del parásito se conserva mejor en esta preparación.
- Malditos ojos permite al microscopista proyectar un mayor volumen de sangre y son aproximadamente once veces más sensibles que la delgada película, por lo que recoger niveles bajos de infección es más fácil en la película gruesa, pero la apariencia del parásito es mucho más distorsionada y por lo tanto distinguir entre las diferentes especies puede ser mucho más difícil.
A partir del frotis grueso, un microscopista experimentado puede detectar todos los parásitos que encuentre. El diagnóstico microscópico puede ser difícil porque los primeros trofozoitos ("forma de anillo") de las cuatro especies parecen idénticos y nunca es posible diagnosticar especies basándose en una única forma de anillo; La identificación de especies siempre se basa en varios trofozoítos.
El mayor obstáculo en la mayoría de los laboratorios de los países desarrollados es dejar un retraso demasiado grande entre la toma de la muestra de sangre y la realización de los frotis de sangre. A medida que la sangre se enfría a temperatura ambiente, los gametocitos masculinos se dividirán y liberarán microgametos: se trata de estructuras filamentosas largas y sinuosas que pueden confundirse con organismos como la Borrelia. Si la sangre se mantiene a temperaturas más cálidas, los esquizontes se romperán y los merozoitos que invaden los eritrocitos darán por error la apariencia de la forma accolé de P. falciparum. Si P. vivax o P. ovale se deja durante varias horas en EDTA, la acumulación de ácido en la muestra hará que los eritrocitos parasitados se reduzcan y el parásito se enrolle simulando la apariencia de P. malariae. Este problema empeora si se utilizan anticoagulantes como la heparina o el citrato. El anticoagulante que menos problemas causa es el EDTA. Generalmente se utiliza la tinción de Romanowsky o una tinción variante. Algunos laboratorios utilizan por error el mismo pH de tinción que utilizan para las extensiones de sangre de hematología de rutina (pH 6,8): las extensiones de sangre de malaria deben teñirse a un pH de 7,2, o los puntos de Schüffner y la tinción de James. Los puntos no se verán.
Los procedimientos de captura inmunocromatográfica (pruebas de diagnóstico rápido, como las pruebas de detección del antígeno de la malaria) son opciones de diagnóstico no microscópicas para el laboratorio que puede no tener disponible la experiencia en microscopía adecuada.
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