Etiqueta proteica

Compartir Imprimir Citar

Las etiquetas proteicas son secuencias peptídicas injertadas genéticamente en una proteína recombinante. A menudo, estas etiquetas se eliminan mediante agentes químicos o medios enzimáticos, como la proteólisis o el empalme de inteínas. Las etiquetas se unen a las proteínas para varios propósitos. Se pueden añadir a cualquiera de los extremos de la proteína diana, por lo que son específicos del extremo C-terminal o del extremo N-terminal o son específicos tanto del extremo C-terminal como del extremo N-terminal. Algunas etiquetas también se insertan en la secuencia de codificación de la proteína de interés; se conocen como etiquetas internas.

Las etiquetas de afinidad se agregan a las proteínas para que puedan purificarse de su fuente biológica cruda utilizando una técnica de afinidad. Estos incluyen proteína de unión a quitina (CBP), proteína de unión a maltosa (MBP), Strep-tag y glutatión-S-transferasa (GST). La etiqueta poli(His) es una etiqueta de proteína ampliamente utilizada, que se une a matrices metálicas.

Se utilizan etiquetas de solubilización, especialmente para proteínas recombinantes expresadas en especies deficientes en chaperonas como E. coli, para ayudar en el plegamiento adecuado de las proteínas y evitar que se precipiten. Estos incluyen tiorredoxina (TRX) y poli(NANP). Algunas etiquetas de afinidad tienen una doble función como agente de solubilización, como MBP y GST.

Las etiquetas de cromatografía se utilizan para alterar las propiedades cromatográficas de la proteína para lograr una resolución diferente en una técnica de separación particular. A menudo, estos consisten en aminoácidos polianiónicos, como FLAG-tag.

Las etiquetas de epítopos son secuencias peptídicas cortas que se eligen porque los anticuerpos de alta afinidad se pueden producir de forma fiable en muchas especies diferentes. Estos generalmente se derivan de genes virales, lo que explica su alta inmunorreactividad. Las etiquetas de epítopo incluyen etiqueta ALFA, etiqueta V5, etiqueta Myc, etiqueta HA, etiqueta Spot, etiqueta T7 y etiqueta NE. Estas etiquetas son particularmente útiles para experimentos de transferencia Western, inmunofluorescencia e inmunoprecipitación, aunque también encuentran uso en la purificación de anticuerpos.

Las etiquetas de fluorescencia se utilizan para dar una lectura visual de una proteína. GFP y sus variantes son las etiquetas de fluorescencia más utilizadas. Las aplicaciones más avanzadas de GFP incluyen su uso como reportero plegable (fluorescente si está doblado, incoloro si no lo está).

Las etiquetas de proteínas pueden permitir una modificación enzimática específica (como la biotinilación por biotina ligasa) o una modificación química (como la reacción con FlAsH-EDT2 para obtener imágenes de fluorescencia). A menudo, las etiquetas se combinan para conectar proteínas a muchos otros componentes. Sin embargo, con la adición de cada etiqueta surge el riesgo de que la función nativa de la proteína pueda ser abolida o comprometida por interacciones con la etiqueta. Por lo tanto, después de la purificación, las etiquetas a veces se eliminan mediante proteólisis específica (p. ej., mediante proteasa TEV, trombina, factor Xa o enteropeptidasa).

Lista de etiquetas de proteínas

(Ver Aminoácido proteinogénico#Propiedades químicas para los códigos de aminoácidos AZ)

Etiquetas peptídicas

Etiquetas de péptidos covalentes

Etiquetas de proteínas

Otros

La etiqueta HiBiT fue desarrollada por científicos de Promega. Es una etiqueta peptídica de 11 aminoácidos y se puede fusionar con el extremo N o C o con ubicaciones internas de las proteínas. Su pequeño tamaño conduce a una rápida activación de esta etiqueta con otras proteínas que interesan a las personas a través de la tecnología CRISPR/Cas9.