Coagulasa

Coagulasa es una enzima proteica producida por varios microorganismos que permite la conversión de fibrinógeno en fibrina. En el laboratorio se utiliza para distinguir entre diferentes tipos de aislados de Estafilococos. Es importante destacar que S. aureus generalmente es coagulasa positiva, lo que significa que una prueba de coagulasa positiva indicaría la presencia de S. aureus o cualquiera de los otros 11 estafilococos coagulasa positivos. En cambio, una prueba de coagulasa negativa mostraría la presencia de organismos coagulasa negativos como S. epidermidis o S. saprophyticus. Sin embargo, ahora se sabe que no todos los S. aureus son coagulasa positivos. Mientras que los estafilococos coagulasa positivos suelen ser patógenos, los estafilococos coagulasa negativos se asocian más a menudo con infecciones oportunistas.

También es producida por Yersinia pestis.

La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama estafilotrombina, que permite que la enzima actúe como una proteasa para convertir el fibrinógeno, una proteína plasmática producida por el hígado, en fibrina. Esto da como resultado la coagulación de la sangre. La coagulasa está estrechamente unida a la superficie de la bacteria S. aureus y puede cubrir su superficie con fibrina al entrar en contacto con la sangre. El coágulo de fibrina puede proteger a la bacteria de la fagocitosis y aislarla de otras defensas del huésped. Por tanto, la capa de fibrina puede hacer que las bacterias sean más virulentas. La coagulasa unida es parte de la familia más amplia de proteínas adhesinas MSCRAMM.

Prueba de coagulasa

La prueba de la coagulasa se ha utilizado tradicionalmente para diferenciar el Staphylococcus aureus de los estafilococos coagulasa negativos. S.aureus produce dos formas de coagulasa (es decir, coagulasa unida y coagulasa libre). La coagulasa unida, también conocida como "factor de aglutinación", se puede detectar mediante una prueba de coagulasa en portaobjetos, y la coagulasa libre se puede detectar mediante una prueba de coagulasa en tubo.

Prueba de diapositiva

Se realiza una prueba de coagulasa en portaobjetos con un control negativo para descartar autoaglutinación. Se colocan dos gotas de solución salina en el portaobjetos etiquetado con el número de muestra, Prueba (T) y control (C). Las dos gotas de solución salina se emulsionan con el organismo de prueba utilizando un lazo de alambre, un alambre recto o un palo de madera. Se coloca una gota de plasma (se recomienda plasma de conejo anticoagulado con EDTA) sobre la gota de solución salina inoculada correspondiente a la prueba, se mezcla bien y luego se agita suavemente el portaobjetos durante unos 10 segundos.

• Si 'positivo', el agrupamiento macroscópico se observa en el plasma dentro de 10 segundos, sin agrupar en la gota salina.
• Si es 'negativo', no se observará ningún agrupamiento.

Si la prueba de coagulasa en portaobjetos es negativa, se debe realizar una prueba en tubo como confirmación. La formación de grumos en ambas gotas es un indicio de autoaglutinación, por lo que se debe realizar una prueba en tubo. La prueba en tubo no se realiza en todas las instituciones, pero la mayor parte del resultado depende de los hemocultivos del laboratorio.

Prueba de tubo

La prueba en tubo utiliza plasma de conejo al que se le ha inoculado una colonia de estafilococos (es decir, cocos grampositivos que son catalasa positivos). Luego, el tubo se incuba a 37 °C durante 1,5 horas. Si es negativo, la incubación continúa hasta 18 horas.

• Si 'positivo' (por ejemplo, la colonia sospechosa es S. aureus), el plasma coagulará, resultando en un coágulo (a veces el coágulo es tan pronunciado, el líquido se solidificará completamente).
• Si 'negativo', el plasma sigue siendo un líquido. El resultado negativo puede ser S. epidermidis pero sólo una prueba de identificación más detallada puede confirmar esto, utilizando pruebas bioquímicas como en métodos de análisis de índice de perfil. Un falso negativo se puede percibir si la muestra no se permite enfriar durante unos 30 minutos a temperatura ambiente o 10 minutos en el congelador, dado que el suero puede derretirse. Si es realmente negativo, el suero permanecerá líquido después del enfriamiento.
• List of coagulase-positive staphylococci: Staphylococcus aureus Subsp. anaerobio, S. aureus subsp. aureusS. delphini, S. hyicus, S. intermedius, S. lutrae, and Staphylococcus schleiferi Subsp. coagulans.
• Lista de estafilococci coagulasa-negativa de importancia clínica: S. saprophyticus, S.cohnii Subsp. cohnii, S. cohnii Subsp. urealyticum, S. captitus Subsp. captitus, S. warneri, S.hominis, S.epidermidis, S. caprae, y S.lugdunensis