Azul nilo
Nilo azul (o Azul Nilo A) es una mancha usada en biología e histología. Se puede utilizar con células vivas o fijas, e imparte un color azul a núcleos celulares.
También se puede utilizar en combinación con microscopía de fluorescencia para manchar por la presencia de gránulos polihidroxibutyrate en células procariotas o eucariotas. Boiling a solution of Nile blue with sulfuric acid produce Nile red (Nile blue oxazone).
Concentraciones, izquierda a derecha: 1000 ppm, 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm, 100 ppb.
Izquierda a la derecha: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14.
izquierda a derecha: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14
izquierda a derecha: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14
De izquierda a derecha: 1. metanol, 2. etanol, 3. Metil-tert-butylether, 4. ciclohexano, 5. n-hexano, 6. acetone, 7. tetrahidrofuran, 8. acetato de etilo, 9. dimetil formamida, 10. acetonitrile, 11. toluene, 12. chloroform
Propiedades químicas y físicas
El azul del Nilo es un tinte fluorescente. La fluorescencia se muestra especialmente en disolventes apolares con un alto rendimiento cuántico.
Los máximos de absorción y emisión del azul del Nilo dependen en gran medida del pH y de los disolventes utilizados:
| Solvent | Absorción λ max (nm) | Emission λ max (nm) |
|---|---|---|
| Toluene | 493 | 574 |
| Acetone | 499 | 596 |
| Dimethylformamide | 504 | 598 |
| Cloroformo | 624 | 647 |
| 1-Butanol | 627 | 664 |
| 2-propanol | 627 | 665 |
| Ethanol | 628 | 667 |
| Metanol | 626 | 668 |
| Agua | 635 | 674 |
| 1.0 M hydrochloric acid (pH = 1.0) | 457 | 556 |
| 0.1 Solución de hidróxido de sodio (pH = 11.0) | 522 | 668 |
| Agua de amoníaco (pH = 13.0) | 524 | 668 |
La duración de la fluorescencia del azul del Nilo en etanol se midió como 1,42 ns. Esto es más corto que el valor correspondiente del rojo del Nilo con 3,65 ns. La duración de la fluorescencia es independiente de la dilución en el rango de 10−3 a 10−8 mol/L.
Tinción con azul del Nilo
El azul del Nilo se utiliza para la tinción histológica de preparaciones biológicas. Destaca la distinción entre lípidos neutros (triglicéridos, ésteres de colesterilo, esteroides) que se tiñen de rosa y ácidos (ácidos grasos, cromolípidos, fosfolípidos) que se tiñen de azul.
La tinción con azul del Nilo, según Kleeberg, utiliza los siguientes productos químicos:
- Nile Blue A
- Ácido acético 1%
- Glycerol o glicerol gelatin
Flujo de trabajo
La muestra o las secciones congeladas se fijan en formaldehído, luego se sumergen durante 20 minutos en la solución de azul del Nilo o 30 segundos en azul del Nilo A (1% p/v en agua destilada) y se enjuagan con agua. Para una mejor diferenciación, se sumerge en ácido acético al 1% durante 10 a 20 minutos o 30 segundos hasta que los colores sean puros. Esto puede tardar sólo entre 1 y 2 minutos. Luego la muestra se enjuaga minuciosamente con agua (durante una o dos horas). Luego, la muestra teñida se toma en un portaobjetos y se elimina el exceso de agua. La muestra se puede embeber en glicerol o gelatina de glicerol.
Resultados
Los glicéridos insaturados son rosas, núcleos y elastinas son ácidos oscuros, grasos y varias sustancias grasas y mezclas de grasa son azul púrpura.
Ejemplo: Detección de gránulos poli-β-hidroxibutyrate (PHB)
Los gránulos de PHB en las células de Pseudomonas solanacearum se pueden visualizar mediante tinción con azul de Nilo A. Los gránulos de PHB en los frotis teñidos se observan con un microscopio de epifluorescencia en inmersión en aceite, con un aumento de 1000 veces; bajo una longitud de onda de excitación de 450 nm, muestran una fuerte fluorescencia naranja.
Azul del Nilo en electroforesis de ADN
El azul del Nilo también se utiliza aparentemente en una variedad de formulaciones comerciales de detección de ADN utilizadas para la electroforesis de ADN. Como no requiere transiluminación UV para ser visualizada en un gel agarose como con bromuro de ethidio, se puede utilizar para observar el ADN ya que está separado y también como tinte para ayudar en la extracción de gel de fragmentos de ADN sin incurrir en daño por radiación UV.
Nilo azul en oncología
Los derivados del azul del Nilo son fotosensibilizadores potenciales en la terapia fotodinámica de tumores malignos. Estos colorantes se agregan en las células tumorales, especialmente en las membranas lipídicas, y/o están secuestrados y concentrados en orgánulos subcelulares.
Con el derivado del azul del Nilo N-etil-azul del Nilo (EtNBA), los tejidos normales y premalignos en experimentos con animales se pueden distinguir mediante espectroscopia de fluorescencia en imágenes de fluorescencia. EtNBA no muestra efectos fototóxicos.
Síntesis
El azul del Nilo y los colorantes de naftoxazinio relacionados se pueden preparar mediante condensación catalizada por ácido de 5-(dialquilamino)-2-nitrosofenoles con 1-naftilamina, 3-(dialquilamino)fenoles con N-alquilados. 4-nitroso-1-naftilaminas, o N,N-dialquil-1,4-fenilendiaminas con 4-(dialquilamino)-1,2-naftoquinonas. Alternativamente, el producto de una condensación catalizada por ácido de 4-nitroso-N,N-dialquilanilina con 2-naftol (una sal de 9-(dialquilamino)benzo[a]fenoxazin-7-io) se puede oxidar en presencia de una amina, instalando un segundo sustituyente amino en la posición 5 del sistema de benzo[a]fenoxazinio. El siguiente esquema ilustra el primero de estos cuatro enfoques, que conducen al perclorato azul del Nilo:
Contenido relacionado
Ley de Fick
Miscibilidad
Masa molar