Tinción de plata

En patología, Tinción de plata es el uso de la plata para alterar selectivamente la apariencia de un objetivo en la microscopia de las secciones histológicas; en la electroforesis de gel gradiente de temperatura; y en los geles de poliacrilamida.

En vidrieras tradicionales, el tinte plateado es una técnica para producir tonos de amarillo a naranja o marrón (o verde sobre una base de vidrio azul), agregando una mezcla que contiene compuestos de plata (en particular nitrato de plata) y cociendo ligeramente. Se introdujo poco después de 1800 y es la "mancha" en el término "vidrieras". Los compuestos de plata se mezclan con sustancias aglutinantes, se aplican a la superficie del vidrio y luego se cuecen en un horno o horno.

Historia

Camillo Golgi perfeccionó la tinción con plata para el estudio del sistema nervioso. Aunque se desconoce el mecanismo químico exacto por el que esto ocurre, el método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad.

Kerenyi y Gallyas introdujeron la tinción con plata como un procedimiento sensible para detectar trazas de proteínas en geles. La técnica se ha extendido al estudio de otras macromoléculas biológicas que han sido separadas en diversos soportes.

La tinción clásica con azul brillante de Coomassie generalmente puede detectar una banda de proteína de 50 ng; La tinción con plata aumenta la sensibilidad normalmente 50 veces.

Muchas variables pueden influir en la intensidad del color y cada proteína tiene sus propias características de tinción; cristalería limpia, reactivos puros y agua de la más alta pureza son los puntos clave para una tinción exitosa.

Química

Algunas células son argentaffin. Estos reducen la solución de plata a plata metálica después de la fijación con formalina. Otras células son argirófilas. Estos reducen la solución de plata a plata metálica después de haber sido expuesta al tinte que contiene un reductor, por ejemplo, hidroquinona o formalina.

El nitrato de plata forma fosfato de plata insoluble con iones fosfato; este método se conoce como tinción Von Kossa. Cuando se somete a un agente reductor, generalmente hidroquinona, forma plata elemental negra. Se utiliza para el estudio de la formación de partículas de fosfato cálcico durante el crecimiento óseo.

Aplicaciones

Caracterización histológica

La tinción con plata ayuda a la visualización de objetivos de interés, es decir, componentes celulares intracelulares y extracelulares como el ADN y proteínas, como el colágeno tipo III y las fibras de reticulina mediante la deposición de partículas de plata metálica en los objetivos de interés.

Microbiología diagnóstica

Pseudomonas, Legionella, Leptospira, H. pylori, Bartonella y Treponema, y hongos como Pneumocystis, Cryptococcus y Candida son organismos que se tiñen de plata.

Análisis de cariotipo

La tinción con plata se utiliza en el cariotipo. El nitrato de plata tiñe la proteína asociada a la región de organización nucleolar (NOR), produciendo una región oscura donde se deposita la plata y que denota la actividad de los genes de ARNr dentro de la NOR. Los cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22 tienen NOR, que aumentan la actividad de la tinción de plata al menos 50 veces.

Análisis genómico y proteómico

La tinción con plata se utiliza para teñir geles. La tinción de plata de proteínas en geles de agarosa fue desarrollada en 1973 por Kerenyi y Gallyas. Posteriormente se adaptó a geles de poliacrilamida utilizados en SDS-PAGE, y también para teñir ADN o ARN. Las glicosilaciones de glicoproteínas y polisacáridos se pueden oxidar mediante un pretratamiento de 1 hora con ácido peryódico al 0,1% a 4 °C, lo que mejora la unión de los iones de plata y el resultado de la tinción.

Primero, las proteínas se desnaturalizan en el gel mediante una solución fijadora de ácido acético al 10 % y etanol al 30 % y se precipitan, al mismo tiempo que se extrae el detergente (principalmente SDS). De este modo se reduce considerablemente la difusión de las proteínas. Después de repetidos lavados con agua, el gel se incuba en una solución de nitrato de plata. Los iones de plata se unen a las cadenas laterales de las proteínas cargadas negativamente. A continuación se lava el exceso de iones de plata con agua. En el paso final de desarrollo, los iones de plata se reducen a plata elemental mediante la adición de formaldehído alcalino. Esto tiñe los sitios donde están presentes las proteínas, de color marrón a negro.

La intensidad de la tinción depende de la estructura primaria de la proteína. Además, la limpieza de los recipientes utilizados y la pureza de los reactivos influyen en la tinción de plata. Los artefactos comunes en los geles teñidos con plata son bandas de queratina en los rangos de 54-57 kDa y 65-68 kDa como contaminación de la muestra antes de la electroforesis.

Manchas de plata metenamina

Hay varios tintes de plata que incorporan metenamina, entre ellos:

• La mancha de plata de metentamina de Grocott, utilizada ampliamente como una pantalla para organismos fungosos.
• Mancha de Jones, una metentamina plateada-Acido periodico-Esquiff que mancha para la membrana del sótano, aprovechando para ver el GBM "spiked" asociado con la glomerulonefritis membranosa.

Galería

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  Una mancha de plata (GMS) demostrando el hongo Histoplasma En una biopsia hepática.
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  Muestras de ADN amplificadas usando PCR. Se han visualizado muestras usando manchas de plata.
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  Proteínas de membrana RBC separadas por SDS-PAGE y plateado.