Separación inmunomagnética
separación inmunomagnética (IMS) es una herramienta de laboratorio que puede aislar eficazmente células de fluidos corporales o células cultivadas. También se puede utilizar como método para cuantificar la patogenicidad de alimentos, sangre o heces. Los análisis de ADN han apoyado el uso combinado tanto de esta técnica como de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Otra herramienta de separación de laboratorio es la separación magnética por afinidad (AMS), que es más adecuada para el aislamiento de células procarióticas.
IMS se ocupa del aislamiento de células, proteínas y ácidos nucleicos mediante la captura específica de biomoléculas mediante la unión de pequeñas partículas magnetizadas, perlas, que contienen anticuerpos y lectinas. Estas perlas están recubiertas para unirse a biomoléculas específicas, se separan suavemente y pasan por múltiples ciclos de lavado para obtener moléculas específicas unidas a estas perlas súper paramagnéticas, que pueden diferenciarse según la intensidad del campo magnético y las moléculas objetivo, luego se eluyen para recolectar el sobrenadante y luego pueden determinar la concentración de biomoléculas específicas. IMS obtiene ciertas concentraciones de moléculas específicas dentro de las bacterias objetivo.
Se colocará una mezcla de población celular en un campo magnético donde las células luego se unirán a perlas súper paramagnéticas, un ejemplo específico son las Dynabeads (4,5 μm), que permanecerán una vez que se elimine el exceso de sustrato y se unirán al antígeno objetivo. Dynabeads consta de núcleos que contienen hierro, que están cubiertos por una fina capa de una cubierta de polímero que permite la absorción de biomoléculas. Las perlas están recubiertas con anticuerpos primarios, anticuerpos específicos, lectinas, enzimas o estreptavidina; El enlace entre materiales recubiertos con perlas magnetizadas es un conector de ADN escindible, separación de células de las perlas cuando el cultivo de células es más deseable.
Muchas de estas cuentas tienen los mismos principios de separación; sin embargo, la presencia y diferentes intensidades de los campos magnéticos requieren ciertos tamaños de perlas, según las ramificaciones de la separación de la población celular. Las perlas de mayor tamaño (> 2 μm) son el rango más utilizado producido por Dynal (Dynal [UK] Ltd., Wirral, Mersyside, UK; Dynal, Inc., Lake Success, NY). Mientras que las perlas más pequeñas (<100 nm) se utilizan principalmente para el sistema MACS producido por Miltenyi Biotech (Miltenyi Biotech Ltd., Bisley, Surrey, Reino Unido; Miltenyi Biotech Inc., Auburn, CA).
La separación inmunomagnética se utiliza en una variedad de campos científicos que incluyen la biología molecular, la microbiología y la inmunología. (3) Esta técnica de separación no consiste únicamente en la separación de células dentro de la sangre, sino que también puede usarse para técnicas de separación de tumores primarios y en la investigación de metástasis, mediante la separación en partes componentes, creando un retraso de células singulares, luego permitiendo que el anticuerpo adecuado marque la célula. En la investigación de metástasis, esta técnica de separación puede resultar necesaria para separar cuando se proporciona una población de células y se desea aislar células tumorales en tumores, sangre periférica y médula ósea.
Técnica
Los anticuerpos que recubren perlas paramagnéticas se unirán a los antígenos presentes en la superficie de las células, capturando las células y facilitando la concentración de estas células adheridas a las perlas. El proceso de concentración se crea mediante un imán colocado en el costado del tubo de ensayo que atrae las perlas. Sistemas MACS (Sistema de Separación Magnética de Celdas):
Mediante el uso de cuentas super paramagnéticas más pequeñas (aproximadamente 100 nm), que requiere un campo magnético más fuerte para separar las células. Las células se etiquetan con anticuerpos primarios y luego las cuentas MACS se recubren con anticuerpos específicos específicos. Esta suspensión celular etiquetada se coloca en una columna de separación en un campo magnético fuerte. Las células etiquetadas están contenidas, magnetizadas, mientras que en el campo magnético y las células no etiquetadas están suspendidas, no magnetizadas, para ser recolectadas. Una vez eliminados de las células positivas del campo magnético se eluted. Estas cuentas MACS son entonces incorporadas por las células que les permiten permanecer en la columna porque no intruden con el apego celular a la superficie de cultivo a las interacciones de células celulares. A continuación, se aplica un reactivo de eliminación de cuentas para tener una liberación enzimática de las cuentas MACS permitiendo que esas células se vuelvan a etiquetar con algún otro marcador, que luego se ordena.