Separación de ADN por adsorción de sílice
La separación de ADN por adsorción en sílice es un método de separación de ADN que se basa en la unión de moléculas de ADN a superficies de sílice en presencia de ciertas sales y bajo ciertas condiciones de pH.
Operaciones
Para separar el ADN mediante adsorción con sílice, primero se lisa una muestra, lo que libera proteínas, ADN, fosfolípidos, etc. de las células. El tejido restante se descarta. El sobrenadante que contiene el ADN se expone luego a sílice en una solución con alta fuerza iónica. Las mayores eficiencias de adsorción de ADN se producen en presencia de una solución tampón con un pH igual o inferior al pKa de los grupos silanol de la superficie.
El mecanismo que se esconde detrás de la adsorción del ADN sobre la sílice no se entiende del todo; una posible explicación es la reducción de la carga negativa de la superficie de la sílice debido a la alta fuerza iónica del tampón. Esta disminución de la carga superficial conduce a una disminución de la repulsión electrostática entre el ADN cargado negativamente y la sílice cargada negativamente. Mientras tanto, el tampón también reduce la actividad del agua formando iones hidratados. Esto hace que la superficie de la sílice y el ADN se deshidraten. Estas condiciones conducen a una situación energéticamente favorable para que el ADN se adsorba a la superficie de la sílice.
Otra explicación de cómo el ADN se une a la sílice se basa en la acción del cloruro de guanidinio (GuHCl), que actúa como un caótropo. Un caótropo desnaturaliza las biomoléculas al alterar la capa de hidratación que las rodea. Esto permite que los iones con carga positiva formen un puente salino entre la sílice con carga negativa y la cadena principal del ADN con carga negativa en una concentración alta de sal. El ADN puede entonces lavarse con mucha sal y etanol y, finalmente, eluirse con poca sal.
Una vez que el ADN se une a la sílice, se lava para eliminar los contaminantes y, finalmente, se eluye utilizando un tampón de elución o agua destilada.
Véase también
- Purificación de ácido nucleico basada en columna
Referencias
- ^ Liu, Lingling; Guo, Zilong; Huang, Zhenzhen; Zhuang, Jiaqi; Yang, Wensheng (25 de febrero de 2016). "Separación selectiva del tamaño de los fragmentos de ADN mediante partículas de sílice funcionales de lisina". Scientific Reports. 6: 22029. Código:2016NatSR...622029L. doi:10.1038/srep22029. PMC 4766563. PMID 26911527.
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