Prueba de indol
La prueba del indol es una prueba bioquímica que se realiza en especies bacterianas para determinar la capacidad del organismo de convertir el triptófano en indol. Esta división la realiza una cadena de varias enzimas intracelulares diferentes, un sistema generalmente denominado "triptófano".
Bioquímica
El indol se genera por desaminación reductiva del triptófano a través de la molécula intermediaria ácido indolpirúvico. La triptofanasa cataliza la reacción de desaminación, durante la cual se elimina el grupo amina (-NH2) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son indol, ácido pirúvico, amonio (NH4+) y energía. Se requiere fosfato de piridoxal como coenzima.
Realizar una prueba
Al igual que muchas pruebas bioquímicas sobre bacterias, los resultados de una prueba de indol se indican mediante un cambio de color después de una reacción con un reactivo añadido.
El cultivo bacteriano puro debe cultivarse en caldo de triptófano o peptona estéril durante 24 a 48 horas antes de realizar la prueba. Después de la incubación, se añaden al caldo de cultivo cinco gotas del reactivo de Kovac (alcohol isoamílico, para-dimetilaminobenzaldehído, ácido clorhídrico concentrado).
Un resultado positivo se manifiesta por la presencia de un color rojo o violeta rojizo en la capa de alcohol superficial del caldo. Un resultado negativo aparece de color amarillo. También puede darse un resultado variable, que muestra un color naranja como resultado. Esto se debe a la presencia de escatol, también conocido como metil indol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.
El color rojo positivo se forma como resultado de una serie de reacciones. El para-dimetilaminobenzaldehído reacciona con el indol presente en el medio para formar un colorante rojo rosindol. El alcohol isoamílico forma un complejo con el colorante rosindol, lo que hace que precipite. El alcohol restante y el precipitado suben luego a la superficie del medio.
Cuando se realiza la prueba en anaerobios y no fermentadores, se utiliza una variante de esta prueba que utiliza el reactivo de Ehrlich (que utiliza alcohol etílico en lugar de alcohol isoamílico, desarrollado por Paul Ehrlich).
Bacterias indole-positivas
Las bacterias que dan positivo en la prueba de escisión del indol del triptófano incluyen: Aeromonas hydrophila, Aeromonas punctata, Bacillus alvei, Edwardsiella sp., Escherichia coli, Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae, Klebsiella oxytoca, Proteus sp. (no P. mirabilis ni P. penneri), Plesiomonas shigelloides, Pasteurella multocida, Pasteurella pneumotropica, Vibrio sp. y Lactobacillus reuteri.
Bacterias indole-negativas
Las bacterias que dan resultados negativos en la prueba del indol incluyen: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida, Alcaligenes sp., la mayoría de Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., la mayoría de Haemophilus sp., la mayoría de Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica, Pasteurella ureae, Proteus mirabilis, P. penneri, Pseudomonas sp., Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. y Rhizobium sp.
La prueba del indol es una de las cuatro pruebas de la serie IMViC, que busca evidencias de una bacteria entérica. Las otras tres pruebas son: la prueba del rojo de metilo [M], la prueba de Voges-Proskauer [V] y la prueba del citrato [C].
Referencias
- ^ Bachoon, Dave S. y Wendy A. Dustman. Manual de Laboratorio de Microbiología. Ed. Michael Stranz. Mason, OH: Cengage Learning, 2008. Ejercicio 15, "La Flora Norte del Tracto Intestinal" Imprimir.
- MacFaddin, Jean F. "Biochemical Tests for Identification of Medical Bacterias". Williams & Wilkins, 1980, pp 173 – 183.
- Ejemplo de reacciones típicas de la indole
- Angen, O.; Mutters, R.; Caugant, D. A.; Olsen, J. E.; Bisgaard, M. (1999). "Las relaciones tajonómicas del complejo haemolytica [Pasteurella] evaluadas por hibridaciones ADN-DNA y secuenciación 16S rRNA con propuesta de Mannheimia haemolytica gen. nov., comb, nov., Mannheimia granulomatis comb. nov., Mannheimia glucosida sp. nov., Mannheimia ruminalis sp. nov. y Mannheimia varigena sp. nov.". International Journal of Systematic Bacteriology. 49 (1): 67–86. doi:10.1099/00207713-49-1-67. ISSN 0020-7713.