Método de golgi
método de Golgi es una técnica de tinción con plata que se utiliza para visualizar el tejido nervioso bajo microscopía óptica. El método fue descubierto por Camillo Golgi, un médico y científico italiano, que publicó la primera imagen realizada con esta técnica en 1873. Inicialmente se denominó reacción negra (la reazione nera) por Golgi, pero se hizo más conocido como tinción de Golgi o, más tarde, método de Golgi.
La tinción de Golgi fue utilizada por el neuroanatomista español Santiago Ramón y Cajal (1852-1934) para descubrir una serie de hechos novedosos sobre la organización del sistema nervioso, lo que inspiró el nacimiento de la doctrina neuronal. Finalmente, Ramón y Cajal mejoró la técnica utilizando un método que denominó "doble impregnación". La técnica de tinción de Ramón y Cajal, aún en uso, se llama Tinción de Cajal.
Mecanismo
Las células del tejido nervioso están densamente empaquetadas y se puede obtener poca información sobre sus estructuras e interconexiones si se tiñen todas las células. Además, las delgadas extensiones filamentosas de las células neurales, incluidos el axón y las dendritas de las neuronas, son demasiado delgadas y transparentes para verse con técnicas de tinción normales. El método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. El mecanismo por el cual esto sucede aún se desconoce en gran medida. Las dendritas, así como el soma celular, están claramente teñidas de marrón y negro y se pueden seguir en toda su longitud, lo que permitió a los neuroanatomistas rastrear las conexiones entre las neuronas y hacer visible la compleja estructura en red de muchas partes del cerebro y la médula espinal..
La tinción de Golgi se logra impregnando tejido nervioso fijado con aldehído con dicromato de potasio y nitrato de plata. Las células así teñidas se rellenan mediante microcristalización de cromato de plata.
Técnica
Según SynapseWeb, esta es la receta para la técnica de tinción de Golgi:
- Sumergir un bloque (aprox. 10x5 mm) de tejido cerebral formaldehído-fijo (o paraformaldehído- glutaraldehído-perfuso) en una solución acuosa 2% del dicromo potasio durante 2 días
- Secar el bloque en breve con papel filtrante.
- Sumérgete el bloque en una solución acuosa del 2% del nitrato de plata por otros 2 días.
- Cortar secciones aprox. 20–100 μm de espesor.
- Deshidratar rápidamente en etanol, claro y montado (por ejemplo, en Depex o Enthalan).
Desde entonces, esta técnica se ha perfeccionado para sustituir el precipitado de plata con oro sumergiendo la muestra en cloruro de oro y luego en ácido oxálico, seguido de la eliminación de la plata con tiosulfato de sodio. Esto preserva un mayor grado de estructura fina con los detalles ultraestructurales marcados por pequeñas partículas de oro.
Cita
Ramón y Cajal dijo del método de Golgi:
- Expresé la sorpresa que experimenté al ver con mis propios ojos los maravillosos poderes reveladores de la reacción del cromo-plata y la ausencia de cualquier emoción en el mundo científico despertado por su descubrimiento.
- Recuerdos de mi vida, Vol. 2, Historia de mi trabajo científico. Madrid: Moya, 1917, pág. 76.