Inclinación TSI

La prueba de Triple Azúcar Hierro (TSI) es una prueba microbiológica llamada así por su capacidad para evaluar la capacidad de un microorganismo para fermentar azúcares y producir sulfuro de hidrógeno. Se utiliza a menudo para diferenciar bacterias entéricas, como Salmonella y Shigella.

El tubo de ensayo inclinado TSI es un tubo de ensayo que contiene agar, un colorante sensible al pH (rojo fenol), 1 % de lactosa, 1 % de sacarosa, 0,1 % de glucosa, tiosulfato de sodio y sulfato ferroso o sulfato ferroso de amonio.Todos estos ingredientes se mezclan, se calientan hasta alcanzar la esterilidad y se dejan solidificar en el tubo de ensayo en un ángulo inclinado. La forma inclinada de este medio proporciona una variedad de superficies que están expuestas al aire con oxígeno en distintos grados (entorno aeróbico) o no expuestas al aire (entorno anaeróbico).El medio de agar TSI se desarrolló a partir del agar hierro de Kligler, utilizado para la determinación de bacterias fermentadoras de lactosa, y se añadió sacarosa para detectar también estas bacterias.Las bacterias que fermentan cualquiera de los tres azúcares del medio producen subproductos. Estos subproductos suelen ser ácidos, que cambian el color del colorante rojo sensible al pH (rojo fenol) a amarillo. La posición del cambio de color distingue la producción de ácido asociada a la fermentación de la glucosa de los subproductos ácidos de la fermentación de la lactosa o la sacarosa. Si esto ocurre, el sulfuro de hidrógeno recién formado (H
₂S) reacciona con el sulfato ferroso en el medio para formar sulfuro ferroso, que es visible como un precipitado negro. Entre las bacterias productoras de sulfuro se incluyen Salmonella, Proteus, Citrobacter y Edwardsiella. El ennegrecimiento del medio casi siempre se observa en el fondo.Una bacteria que no fermenta la lactosa y fermenta la glucosa, inicialmente produce un fondo amarillo inclinado/amarillo (reacción ácido/ácido) después de 8 horas, pero luego se convierte en un fondo rojo inclinado/amarillo después de 24 horas (reacción álcali/ácido). En cambio, si fermenta tanto lactosa como glucosa, el resultado es un tubo amarillo/amarillo que permanece así debido a la gran cantidad de ácido producido en la reacción. El ennegrecimiento del fondo debido a la producción de H₂S puede enmascarar la reacción ácida (amarillo) en el fondo del tubo. La Salmonella enterica serovar Typhi puede provocar el ennegrecimiento del medio en la interfaz entre el fondo y el tubo inclinado.

En condiciones anaeróbicas (como las que se producen cerca del fondo del tubo), algunas bacterias utilizan el tiosulfato como aceptor de electrones y lo reducen a hidrógeno gaseoso. Este gas no es muy soluble y puede acumularse en forma de burbujas a lo largo del conducto de inoculación, entre el agar y el vidrio, o en el líquido que se acumula en el fondo del tubo inclinado. La producción de hidrógeno puede levantar el agar del fondo del tubo o fracturarlo (agrietarlo). El dióxido de carbono, si se produce, puede no aparecer en forma de burbujas debido a su mayor solubilidad en el medio.

• Cistine tripptic agar