Escaleras de ADN
La formación de escaleras en el ADN es una característica que se puede observar cuando los fragmentos de ADN resultantes de la fragmentación del ADN por apoptosis se visualizan después de su separación por electroforesis en gel. La primera descripción la realizó Andrew Wyllie en 1980 en la facultad de medicina de la Universidad de Edimburgo. Los fragmentos de ADN también se pueden detectar en células que han sufrido necrosis, pero cuando estos fragmentos de ADN, después de su separación, se someten a electroforesis en gel, no se observa un patrón claro de "escalera".
Degradación del ADN
La formación de escalones en el ADN es una característica distintiva del ADN degradado por la DNasa activada por caspasa (CAD), que es un evento clave durante la apoptosis. La CAD corta el ADN genómico en las regiones de unión internucleosómicas, lo que da como resultado fragmentos de ADN que son múltiplos de 180-185 pares de bases de longitud. La separación de los fragmentos mediante electroforesis en gel de agarosa y la posterior visualización, por ejemplo mediante tinción con bromuro de etidio, da como resultado un patrón característico de "escalera". Un método simple de extracción selectiva de ADN fragmentado de células apoptóticas sin la presencia de secciones de ADN de alto peso molecular, que genera el patrón de formación de escalones, utiliza el pretratamiento de las células en etanol.
Apoptosis y necrosis
Si bien la mayoría de las características morfológicas de las células apoptóticas son de corta duración, el encadenamiento de ADN se puede utilizar como método de lectura del estado final y, por lo tanto, se ha convertido en un método confiable para distinguir la apoptosis de la necrosis. El encadenamiento de ADN también se puede utilizar para ver si las células sufrieron apoptosis en presencia de un virus. Esto es útil porque puede ayudar a determinar los efectos que tiene un virus en una célula.
El encadenamiento de ADN solo se puede utilizar para detectar la apoptosis durante las últimas etapas de la apoptosis. Esto se debe a que la fragmentación del ADN tiene lugar en una etapa posterior del proceso de apoptosis. El encadenamiento de ADN se utiliza para comprobar la apoptosis de muchas células, y no es preciso para comprobar solo unas pocas células que han sufrido apoptosis. Para mejorar la precisión en las pruebas de apoptosis, se utilizan otros ensayos junto con el encadenamiento de ADN, como TEM y TUNEL. Con las recientes mejoras en el encadenamiento de ADN, se ha convertido en una técnica más fiable y razonable para utilizar en la detección de la apoptosis. También es importante tener en cuenta que el encadenamiento de ADN se produce de forma diferente según el tipo de célula, por lo que puede haber ligeros cambios en el proceso de encadenamiento de ADN según la célula que se esté investigando.
Véase también
- fragmentación de ADN apoptótico
- Caspase-activated DNase
- Nicoletti ensayo
- TUNEL ensayo
Referencias
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