Ensayo de huella de ADNasa
Un ensayo de huella de ADN es una técnica de huella de ADN de biología/bioquímica molecular que detecta la interacción ADN-proteína utilizando el hecho de que una proteína unida al ADN a menudo protegerá ese ADN de la escisión enzimática. Esto hace posible localizar un sitio de unión a proteínas en una molécula de ADN particular. El método utiliza una enzima, la desoxirribonucleasa (DNasa, para abreviar), para cortar el ADN marcado radiactivamente, seguido de electroforesis en gel para detectar el patrón de escisión resultante.
Por ejemplo, el fragmento de ADN de interés puede amplificarse por PCR utilizando un receptor 32P 5' cebador marcado, con el resultado de muchas moléculas de ADN con una etiqueta radiactiva en un extremo de una hebra de cada molécula de doble hebra. La escisión por DNasa producirá fragmentos. Los fragmentos que son más pequeños con respecto al extremo marcado con 32P aparecerán más lejos en el gel que los fragmentos más largos. Luego, el gel se utiliza para exponer una película fotográfica especial.
El patrón de escisión del ADN en ausencia de una proteína de unión al ADN, normalmente denominado ADN libre, se compara con el patrón de escisión del ADN en presencia de una proteína de unión al ADN. Si la proteína se une al ADN, el sitio de unión queda protegido de la escisión enzimática. Esta protección dará como resultado un área clara en el gel que se conoce como "huella".
Al variar la concentración de la proteína de unión al ADN, se puede estimar la afinidad de unión de la proteína de acuerdo con la concentración mínima de proteína a la que se observa una huella.
Esta técnica fue desarrollada por David J. Galas y Albert Schmitz en Ginebra en 1977.