Cultivo microbiológico

Un cultivo microbiológico, o cultivo microbiano, es un método para multiplicar organismos microbianos permitiéndoles reproducirse en un medio de cultivo predeterminado en condiciones controladas de laboratorio. Los cultivos microbianos son métodos de diagnóstico básicos y fundamentales que se utilizan como herramientas de investigación en biología molecular.

El término cultivo también puede referirse a los microorganismos que se cultivan.

Los cultivos microbianos se utilizan para determinar el tipo de organismo, su abundancia en la muestra que se analiza, o ambas cosas. Es uno de los principales métodos de diagnóstico de la microbiología y se utiliza como herramienta para determinar la causa de una enfermedad infecciosa al permitir que el agente se multiplique en un medio predeterminado. Por ejemplo, un cultivo de garganta se toma raspando el revestimiento de tejido en la parte posterior de la garganta y secando la muestra en un medio para poder detectar microorganismos dañinos, como Streptococcus pyogenes, el causante. agente de la faringitis estreptocócica. Además, el término cultura se utiliza más generalmente de manera informal para referirse a la cultura de “crecimiento selectivo”. un tipo específico de microorganismo en el laboratorio.

A menudo es esencial aislar un cultivo puro de microorganismos. Un cultivo puro (o axénico) es una población de células u organismos multicelulares que crecen en ausencia de otras especies o tipos. Un cultivo puro puede originarse a partir de una sola célula o de un solo organismo, en cuyo caso las células son clones genéticos unas de otras. Para gelificar el cultivo microbiano se utiliza el medio de gel de agarosa (agar). El agar es una sustancia gelatinosa derivada de las algas. Un sustituto económico del agar es la goma guar, que puede utilizarse para el aislamiento y mantenimiento de termófilos.

Cultivo bacteriano

Existen varios tipos de métodos de cultivo bacteriano que se seleccionan en función del agente que se cultiva y el uso posterior.

Cultivos de caldo

Un método de cultivo bacteriano es el cultivo líquido, en el que las bacterias deseadas se suspenden en un medio nutritivo líquido, como caldo Luria, en un matraz vertical. Esto permite a un científico cultivar grandes cantidades de bacterias para una variedad de aplicaciones posteriores.

Los cultivos líquidos son ideales para la preparación de un ensayo antimicrobiano en el que el caldo líquido se inocula con bacterias y se deja crecer durante la noche (se puede utilizar una "agitadora" para mezclar mecánicamente el caldo y fomentar un crecimiento uniforme). Posteriormente, se toman alícuotas de la muestra para comprobar la actividad antimicrobiana de un fármaco o proteína específica (péptidos antimicrobianos).

Se pueden utilizar cultivos líquidos estáticos como alternativa. Estos cultivos no se agitan y proporcionan a los microbios un gradiente de oxígeno.

Placas de agar

Los cultivos microbiológicos se pueden cultivar en placas de Petri de diferentes tamaños que tienen una capa delgada de medio de crecimiento a base de agar. Una vez que el medio de crecimiento en la placa de Petri se inocula con las bacterias deseadas, las placas se incuban a la temperatura óptima para el crecimiento de las bacterias seleccionadas (por ejemplo, generalmente a 37 grados Celsius, o la temperatura corporal humana, para cultivos de humanos o animales, o más bajos para cultivos ambientales). Después de alcanzar el nivel deseado de crecimiento, las placas de agar se pueden almacenar boca abajo en un refrigerador durante un período prolongado de tiempo para mantener bacterias para futuros experimentos.

Hay una variedad de aditivos que se pueden agregar al agar antes de verse en una placa y se les deja solidificar. Algunos tipos de bacterias solo pueden crecer en presencia de ciertos aditivos. Esto también se puede usar al crear cepas de bacterias diseñadas que contienen un gen de resistencia a los antibióticos. Cuando se agrega el antibiótico seleccionado al agar, solo las células bacterianas que contienen la resistencia de conferencias de inserción del gen podrán crecer. Esto permite al investigador seleccionar solo las colonias que se transformaron con éxito.

dipsticks basadas en agar

Versión miniaturizada de placas de agar implementadas en formatos de varilla de mediana, por ejemplo. Dip Slide, Digital Dipstick muestran potencial para usarse en el punto de atención para fines de diagnóstico. Tienen ventajas sobre las placas de agar, ya que son rentables y su operación no requiere experiencia o entorno de laboratorio, lo que les permite usarse en el punto de atención.

Culturas de puñalada

Los cultivos Stab son similares a las placas de agar, pero están formados por agar sólido en un tubo de ensayo. Las bacterias se introducen mediante una aguja de inoculación o la punta de una pipeta que se introduce en el centro del agar. Las bacterias crecen en el área perforada. Los cultivos Stab se utilizan más comúnmente para el almacenamiento o envío de cultivos a corto plazo.

Colecciones culturales

Las colecciones de cultivos microbianos se centran en la adquisición, autenticación, producción, preservación, catalogación y distribución de cultivos viables de microorganismos de referencia estándar, líneas celulares y otros materiales para la investigación en sistemática microbiana. Las colecciones de cultivos también son depósitos de cepas tipo.

Cultura de placa sólida de microorganismos termofílicos

Para cultivos de placas sólidas de microorganismos termofílicos como bacillus acidocaldarius, bacillus stearothermophilus, térmico acuaticus y termus thermophilus etc. creciendo a temperaturas de 50 a 70 grados c, bajo, bajo, bajo Se ha demostrado que Gellan Gellan de acilo es el agente gelificante preferido en comparación con el agar para el conteo o el aislamiento o ambas de las bacterias termofílicas anteriores.

cultivo viral

Los cultivos de virus y fagos requieren células huésped en las que el virus o el fago se multiplican. Para los bacteriófagos, los cultivos se cultivan al infectar las células bacterianas. El fago se puede aislar de las placas resultantes en un césped de bacterias en un plato. Los cultivos virales se obtienen de sus células huésped eucariotas apropiadas. El método de la placa de racha es una forma de separar físicamente la población microbiana, y se realiza extendiendo el inoculado de ida y vuelta con un bucle inoculante sobre la placa de agar sólido. Tras la incubación, surgirán colonias y las células individuales se habrán aislado de la biomasa. Una vez que un microorganismo se ha aislado en cultura pura, es necesario preservarlo en un estado viable para un mayor estudio y uso en culturas llamadas culturas de existencias. Se deben mantener estas culturas, de modo que no hay pérdida de sus caracteres biológicos, inmunológicos y culturales.

cultivo celular eucariota

aislamiento de cultivos puros

Para eucariotas de células individuales, como la levadura, el aislamiento de cultivos puros utiliza las mismas técnicas que para los cultivos bacterianos. Los cultivos puros de organismos multicelulares a menudo se aislan más fácilmente simplemente eligiendo a un solo individuo para iniciar una cultura. Esta es una técnica útil para el cultivo puro de hongos, algas multicelulares y metazoa pequeña, por ejemplo.

El desarrollo de técnicas de cultivo puro es crucial para la observación del espécimen en cuestión. El método más común para aislar células individuales y producir un cultivo puro es preparar una placa de racha. El método de la placa de racha es una forma de separar físicamente la población microbiana, y se realiza extendiendo el inoculado de ida y vuelta con un bucle inoculante sobre la placa de agar sólido. Tras la incubación, surgirán colonias y las células individuales se habrán aislado de la biomasa. Una vez que un microorganismo se ha aislado en cultivo puro, es necesario preservarlo en un estado viable para su posterior estudio y uso. Las culturas de existencias deben mantenerse, de modo que no hay pérdida de sus caracteres biológicos, inmunológicos y culturales.