Colorimetría (método químico)

En química física y analítica, la colorimetría es una técnica que se utiliza para determinar la concentración de compuestos coloreados en una solución. Un colorímetro es un dispositivo que se utiliza para evaluar la magnitud de una solución midiendo su absorbancia de una longitud de onda específica (no debe confundirse con el colorímetro triestímulo, utilizado para medir colores en general).

Para usar el colorímetro, se deben preparar diferentes soluciones, incluyendo una de control o referencia de concentración conocida. Con un colorímetro visual, por ejemplo, el colorímetro Duboscq ilustrado, se puede variar la longitud del recorrido de la luz a través de las soluciones mientras se compara la luz filtrada transmitida a través de ellas para una coincidencia visual. La concentración por el recorrido se considera igual cuando los colores coinciden, por lo que la concentración de la sustancia desconocida se puede determinar mediante proporciones simples. Los tubos de Nessler funcionan con el mismo principio.También existen colorímetros electrónicos automatizados; antes de utilizarlos, deben calibrarse con una cubeta que contiene la solución de control. La concentración de una muestra puede calcularse a partir de la intensidad de la luz antes y después de atravesarla mediante la ley de Beer-Lambert. Los analizadores fotoeléctricos se popularizaron en la década de 1960.El color o la longitud de onda del filtro elegido para el colorímetro es fundamental, ya que la longitud de onda de la luz que transmite debe ser la misma que la que absorbe la sustancia que se mide. Por ejemplo, el filtro de un colorímetro podría estar configurado en rojo si el líquido es azul.Un colorímetro es un dispositivo que se utiliza para comprobar la concentración de una solución midiendo su absorbancia a una longitud de onda específica. Para utilizar este dispositivo, se deben preparar diferentes soluciones y, primero, se llena una cubeta con un control (generalmente una mezcla de agua destilada y otra solución) y se coloca dentro del colorímetro para calibrarlo. Solo después de calibrar el dispositivo, se puede utilizar para determinar las densidades o concentraciones de las demás soluciones. Esto se hace repitiendo la calibración, excepto con las cubetas llenas con las demás soluciones. El filtro de un colorímetro debe configurarse en rojo si el líquido es azul. El tamaño del filtro elegido inicialmente para el colorímetro es fundamental, ya que la longitud de onda de la luz que transmite el colorímetro debe ser la misma que la que absorbe la sustancia.Los ensayos colorimétricos utilizan reactivos que experimentan un cambio de color medible en presencia del analito. Se utilizan ampliamente en bioquímica para detectar la presencia de enzimas, compuestos específicos, anticuerpos, hormonas y muchos otros analitos. Por ejemplo,

• Para-Nitrophenylphosphate se convierte en un producto amarillo por enzima fosfatasa alcalina.
• Coomassie El azul es un tinte aromático que se une a las proteínas aromáticas y los residuos de aminoácidos cargados positivamente dentro de la estructura de proteínas. La interacción vinculante resulta en un cambio de espectro, permitiendo la medición cuantitativa de la concentración de proteínas. Un ensayo colorimétrico similar, el ensayo de ácido bicinchoninico, utiliza una reacción química para determinar la concentración de proteínas.
• El ensayo Biuret utiliza un reactivo de biureto que se convierte en púrpura en presencia de proteínas debido a la quilación de sales de cobre en una solución alcalina.
• Los inmunoensayos vinculados a la enzima usan anticuerpos complejos de enzimas para detectar antígenos. La unión del anticuerpo suele inferirse del cambio de color de reactivos como TMB.

• Jules Duboscq
• Permanganometría
• Colorímetro Lovibond
• Turbidimetría