Caldo de lisogenia

caldo de lisogenia (LB) es un medio nutricionalmente rico que se utiliza principalmente para el crecimiento de bacterias. Su creador, Giuseppe Bertani, pretendía que LB significara caldo de lisogenia, pero LB también ha llegado a significar coloquialmente caldo de Luria, Lennox. caldo, caldo de vida o medio Luria-Bertani. La fórmula del medio LB fue publicada en 1951 en el primer artículo de Bertani sobre lisogenia. En este artículo describió el experimento de ráfaga única modificado y el aislamiento de los fagos P1, P2 y P3. Había desarrollado el medio LB para optimizar el crecimiento de Shigella y la formación de placa.

Las formulaciones de medio LB han sido un estándar industrial para el cultivo de Escherichia coli desde la década de 1950. Estos medios se han utilizado ampliamente en aplicaciones de microbiología molecular para la preparación de ADN plasmídico y proteínas recombinantes. Sigue siendo uno de los medios más comunes utilizados para mantener y cultivar cepas recombinantes de laboratorio de Escherichia coli. Sin embargo, para estudios fisiológicos se desaconseja el uso del medio LB.

Hay varias formulaciones comunes de LB. Aunque son diferentes, generalmente comparten una composición algo similar de ingredientes utilizados para promover el crecimiento, incluidos los siguientes:

• Péptidos y peptones de caseína
• Vitaminas (incluyendo vitaminas B)
• Elementos de rastro (por ejemplo, nitrógeno, azufre, magnesio)
• Minerales

El cloruro de sodio proporciona iones de sodio para el transporte y el equilibrio osmótico. La triptona se usa para proporcionar aminoácidos esenciales, como péptidos y peptonas, a las bacterias en crecimiento, mientras que el extracto de levadura se usa para proporcionar una gran cantidad de compuestos orgánicos útiles para el crecimiento bacteriano. Estos compuestos incluyen vitaminas y ciertos oligoelementos.

En su artículo original de 1951, Bertani usó 10 gramos de NaCl y 1 gramo de glucosa por 1 litro de solución; Luria en su "caldo L" de 1957 copió exactamente la receta original de Bertani. Las recetas publicadas posteriormente normalmente no incluyen la glucosa.

Fórmula

Las formulaciones generalmente difieren en la cantidad de cloruro de sodio, lo que permite seleccionar las condiciones osmóticas apropiadas para la cepa bacteriana particular y las condiciones de cultivo deseadas. Las formulaciones bajas en sal, Lennox y Luria, son ideales para cultivos que requieren antibióticos sensibles a la sal.

• LB (Miller) (10 g/L NaCl)
• LB (Lennox) (5 g/L NaCl)
• LB (Luria) (0,5 g/L NaCl)

Preparación

El siguiente es un método común para la preparación de 1 litro de LB:

• Medir lo siguiente:
  • 10 g tryptone
  • 5 g extracto de levadura
  • 10 o 5 o 0,5 g NaCl según sea necesario (ver Fórmula arriba; algunas bacterias son sensibles a NaCl)
• Suspendieron los sólidos en ~800 ml de agua destilada o deionizada.
• Agregue más agua destilada o agua desionizada, en un cilindro de medición para asegurar la precisión, para hacer un total de 1 litro.
• Autoclave a 121 °C para 20 minutos.
• Después de enfriar, girar el frasco para asegurar la mezcla, y el LB está listo para su uso.

Ajuste del pH

Antes de esterilizarlo en autoclave, algunos laboratorios ajustan el pH de LB a 7,5 u 8 con hidróxido de sodio. Sin embargo, el hidróxido de sodio no proporciona ninguna capacidad amortiguadora al medio y esto da como resultado cambios rápidos en el pH durante el cultivo de bacterias. Para evitar esto, algunos laboratorios prefieren ajustar el pH con 5-10 mmol/L de tampón TRIS, diluido a partir de 1 mol/L de solución TRIS al pH deseado. Sin embargo, no es absolutamente necesario ajustar el pH en la mayoría de las situaciones. Algunos laboratorios ajustan el pH a 7,0 simplemente como precaución.

Dado que la amortiguación con TRIS también será en gran medida ineficaz ante un crecimiento bacteriano sustancial, generalmente no es necesario ajustar el pH de LB de esta manera particular. Como tal, el uso de TRIS en algunas recetas de caldos (especialmente cuando el cultivo se almacenará a temperatura ambiente durante períodos prolongados) puede considerarse un procedimiento supersticioso sin mucho mérito científico.