Calceína
La calceína, también conocida como fluorexón, complejo de fluoresceína, es un colorante fluorescente con longitudes de onda de excitación y emisión de 495 y 515 nm, respectivamente, y tiene la apariencia de cristales anaranjados. La calceína se autoextingue en concentraciones superiores a 70 mM y se utiliza comúnmente como indicador de fuga de vesículas lipídicas. También se ha utilizado tradicionalmente como indicador complexométrico para la titulación de iones de calcio con EDTA y para la determinación fluorométrica del calcio.
Aplicaciones
El derivado acetometoxi no fluorescente de la calceína (calceína AM, AM = acetoximetilo) se utiliza en biología, ya que puede transportarse a través de la membrana celular hasta las células vivas, lo que lo hace útil para probar la viabilidad celular y para el etiquetado de células a corto plazo. Alternativamente, se pueden utilizar Fura-2, Furaptra, Indo-1 y aequorina. Un grupo acetometoxi oscurece la parte de la molécula que forma quelatos de Ca2+, Mg2+, Zn2+ y otros iones. Después del transporte a las células, las esterasas intracelulares eliminan el grupo acetometoxi, la molécula queda atrapada en el interior y emite una fuerte fluorescencia verde. Como las células muertas carecen de esterasas activas, solo las células vivas se etiquetan y cuentan mediante citometría de flujo.
En la actualidad, la calceína rara vez se utiliza como indicador de Ca2+ o Mg2+ porque su fluorescencia es directamente sensible a estos iones solo a pH fuertemente alcalino y, por lo tanto, no es particularmente útil para medir Ca2+ o Mg2+ en células. La fluorescencia de la calceína se ve fuertemente extinguida por Co2+, Ni2+ y Cu2+ y apreciablemente por Fe3+ y Mn2+ a pH fisiológico. Esta respuesta de extinción de la fluorescencia se puede aprovechar para detectar la apertura del poro de transición de permeabilidad mitocondrial (mPTP) y para medir los cambios de volumen celular. La calceína se utiliza comúnmente para el rastreo celular y en estudios de endocitosis, migración celular y uniones en hendidura.
El éster acetoximetil de calceína también se utiliza para detectar interacciones farmacológicas con proteínas de resistencia a múltiples fármacos (transportadores ABC, genes transportadores de casete de unión a ATP) en células intactas, ya que es un excelente sustrato de la glicoproteína P transportadora de resistencia a múltiples fármacos 1 (MDR1) y de la proteína asociada a la resistencia a múltiples fármacos (MRP1). El ensayo de calceína AM se puede utilizar como modelo para interacciones fármaco-fármaco, para detectar sustratos transportadores y/o inhibidores; y también para determinar la resistencia a fármacos in vitro de las células, incluidas muestras de pacientes.
La calceína también se utiliza para marcar peces recién nacidos y para etiquetar huesos en animales vivos.
Referencias
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