Blot (biología)
A blot, en biología molecular y genética, es un método de transferencia de proteínas, ADN o ARN a un portador (por ejemplo, una nitrocelulosa, fluoruro de poliviniloidea o membrana de nylon). En muchos casos, esto se hace después de una electroforesis de gel, transfiriendo las moléculas del gel a la membrana de hinchazón, y otras veces agregando las muestras directamente a la membrana. Después de la hinchazón, las proteínas transferidas, ADN o ARN se visualizan luego por manchas colorantes (por ejemplo, tinción de plata de proteínas), visualización de las moléculas radializadas (performe antes de la mancha), o etiquetado específico de algunas proteínas o ácidos nucleicos. Este último se hace con anticuerpos o sondas de hibridación que se unen sólo a algunas moléculas de la mancha y tienen una enzima unida a ellas. Después del lavado adecuado, esta actividad enzimática (y por lo tanto, las moléculas que buscamos en la mancha) es visualizada por incubación con correcto reactivación, lo que hace ya sea un depósito coloreado en la mancha o una reacción de la quimioscencia que está registrada por la película fotográfica.
Mancha del Sur
Una transferencia Southern es un método utilizado habitualmente en biología molecular para la detección de una secuencia de ADN específica en muestras de ADN. La transferencia Southern combina la transferencia de fragmentos de ADN separados por electroforesis a una membrana de filtro y la posterior detección de fragmentos mediante hibridación de sonda.
Mancha occidental
Se utiliza una mancha occidental para la detección de proteínas específicas en muestras complejas. Las proteínas se separan primero por tamaño utilizando electroforesis antes de ser transferidas a una matriz de hinchazón adecuada (generalmente fluoruro de poliviniloide o nitrocelulosa) y posterior detección con anticuerpos.
Borde faro-oeste
Al igual que una transferencia Western, la transferencia Far-Western utiliza interacciones proteína-proteína para detectar la presencia de una proteína específica inmovilizada en una matriz de transferencia. Luego se utilizan anticuerpos para detectar la presencia del complejo proteína-proteína, lo que convierte a la transferencia Far-Western en un caso específico de la transferencia Western.
Mancha del suroeste
La transferencia Southwestern se basa en la transferencia Southern y se utiliza para identificar y caracterizar proteínas de unión al ADN por su capacidad para unirse a sondas oligonucleotídicas específicas. Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel y posteriormente se transfieren a membranas de nitrocelulosa de forma similar a otros tipos de transferencia.
Mancha oriental
La transferencia Eastern se utiliza para la detección de modificaciones postraduccionales específicas de proteínas. Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel antes de transferirlas a una matriz de transferencia, tras lo cual se detectan modificaciones postraduccionales mediante sustratos específicos (toxina del cólera, concanavalina, fosfomolibdato, etc.) o anticuerpos.
Mancha del Lejano Oriente
La transferencia del Lejano Oriente es para la detección de oligosacáridos unidos a lípidos. La cromatografía de capa fina de alto rendimiento se utiliza primero para separar los lípidos por características físicas y químicas, luego se transfiere a una matriz de transferencia antes de que los oligosacáridos sean detectados por una proteína de unión específica (es decir, anticuerpos o lectinas).
Transferencia Northern
La transferencia Northern sirve para la detección de secuencias de ARN específicas en muestras complejas. La transferencia Northern primero separa las muestras por tamaño mediante electroforesis en gel antes de transferirlas a una matriz de transferencia y detectarlas con sondas de ARN marcadas.
Blot Northern inverso
La transferencia Northern inversa se diferencia de la transferencia Northern y Southern en que primero se inmoviliza el ADN en una matriz de transferencia y se detectan secuencias específicas con sondas de ARN marcadas.
Mancha de puntos
Una transferencia puntual es un caso especial de cualquiera de las transferencias anteriores donde el analito se agrega directamente a la matriz de transferencia (y aparece como un "punto") en lugar de separar la muestra mediante electroforesis antes de secando.
Lista de borrones
- Parcela sur para ADN
- Parcela norteña para ARN
- Borde norte inverso para ARN
- Western blot for proteins
- trama lejana para interacciones proteína-proteína
- blot oriental para la modificación post-translacional
- trama lejana para los glucólipidos
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