Aloficocianina
Aloficocianina ("otra proteína azul de algas"; del griego: ἄλλος (allos) que significa "otro", φύκος (phykos) que significa “alga” y κυανός (kyanos) que significa "azul") es una proteína de la familia de las ficobiliproteínas que captan la luz, junto con la ficocianina, la ficoeritrina y la ficoeritrocianina. . Es un pigmento accesorio de la clorofila. Todas las ficobiliproteínas son solubles en agua y, por lo tanto, no pueden existir dentro de la membrana como los carotenoides, sino que se agregan formando grupos que se adhieren a la membrana llamados ficobilisomas. La aloficocianina absorbe y emite luz roja (650 y 660 nm como máximo, respectivamente) y se encuentra fácilmente en las cianobacterias (también llamadas algas verdiazules) y en las algas rojas. Los pigmentos de ficobilina tienen propiedades fluorescentes que se utilizan en kits de inmunoensayo. En citometría de flujo, a menudo se abrevia APC. Para poder utilizarlo eficazmente en aplicaciones como FACS, detección de alto rendimiento (HTS) y microscopía, el APC debe estar reticulado químicamente.
Características estructurales
La aloficocianina se puede aislar de varias especies de algas rojas o verdiazules, cada una de las cuales produce formas ligeramente diferentes de la molécula. Está compuesto por dos subunidades diferentes (α y β) en las que cada subunidad tiene un cromóforo de ficocianobilina (PCB). La estructura de subunidades de APC se ha determinado como (αβ)3. El peso molecular del APC es de 105.000 daltons.
Características espectrales
| Absorción máxima | 652 nm |
| pico adicional de absorción | 625 nm |
| Máximo de emisión | 657,5 nm |
| Stokes Shift | 5,5 nm |
| Coeficiente de extinción | 700.000 M−1cm−1 |
| Rendimiento cuántico | 0,688 |
| Brillo | 1,6 x 105 M−1cm−1 |
Cross-linked APC
Como se mencionó anteriormente, para que la APC sea útil en inmunoensayos primero debe ser interrelacionada químicamente para evitar que se disocia en sus subunidades componentes cuando en los búferes fisiológicos comunes. El método convencional para lograr esto es a través de un proceso destructivo en el que el trimer APC tratado se interrumpe químicamente en la urea 8M y luego se permite volver a asociarse en un búfer fisiológico. Se puede utilizar un método alternativo que preserva la integridad estructural del trimer APC y permite un producto final más brillante y estable.
Aplicaciones
Muchas aplicaciones e instrumentos se desarrollaron específicamente para la aloficocianina. Se utiliza comúnmente en inmunoensayos como FACS, citometría de flujo y detección de alto rendimiento como aceptor de europio mediante ensayos de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET).