3,3',5,5'-Tetrametilbencidina
La 3,3′,5,5′-tetrametilbencidina o TMB es un sustrato cromogénico que se utiliza en procedimientos de tinción en inmunohistoquímica y también es un reactivo de visualización utilizado en ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA). La TMB es un sólido blanco que forma un líquido verde azulado pálido en solución con acetato de etilo. La TMB se degrada con la luz solar y con luces fluorescentes. Se utiliza para detectar hematuria, ya que se vuelve azul en contacto con la hemoglobina.
Ensayo enzimático
El TMB puede actuar como donante de hidrógeno para la reducción del peróxido de hidrógeno a agua mediante enzimas peroxidasas como la peroxidasa de rábano picante.
El producto de oxidación de un electrón resultante es un complejo diimina-diamina, que hace que la solución adquiera un color azul; este cambio de color se puede leer en un espectrofotómetro a longitudes de onda de 370 y 650 nm.
La reacción se puede detener mediante la adición de ácido u otro reactivo de parada. El uso de ácido sulfúrico hace que el TMB se torne amarillo, con una absorbancia máxima de 450 nm. La cantidad de TMB convertido se puede indexar por la cantidad de luz de 450 nm que absorbe.
Seguridad del material
El TMB debe mantenerse alejado de la luz solar directa, ya que es fotosensible. No se sabe si el TMB es cancerígeno y las pruebas son contradictorias: el TMB no es mutagénico según la prueba de Ames y no indujo la formación de tumores en un estudio de un solo brazo con 24 ratas. Según esas pruebas, se ha utilizado como sustituto de compuestos cancerígenos como la bencidina y la o-fenilendiamina.
Referencias
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